单克隆抗体制备技术

单克降抗体技术是现代生命科学研究的重要工具，自1975年杂交瘤单克隆抗体技术的出现，单克隆抗体迅速在生命科学研究和临床检测诊断中得到了广泛的应用，为许多领域的发展做出了不可估量的贡献。目前单克降抗体制备技术有杂交瘤技术、噬菌体展示技术以及单个B细胞抗体开发技术等。

单抗开发三大平台

单个B细胞技术

• 29天100株抗体
• 重轻链天然配对
• 保留抗体多样性

杂交瘤技术

• 3000株杂交瘤开发经验
• 重轻链天然配对

噬菌体展示技术

• 无物种限制
• 免疫库库容可达10⁸

单个B细胞抗体制备技术

单个B细胞抗体开发技术是近年来新兴的单抗制备技术。它是将单细胞分离鉴定技术结合多种PCR技术形成的一种单克隆抗体体外筛选及表达体系。单个B细胞抗体开发技术利用每个B细胞只产生一种特异性抗体的特性，使用流式细胞术、微流控技术等方法对免疫动物的B细胞进行抗原特异性单细胞分选，通过PCR扩增及一代、二代测序获得抗体基因序列，并在哺乳动物细胞中进行表达。

德泰生物基于单个B细胞抗体开发技术，自主研发了SingleB^®单B细胞快速单抗发现平台。平台支持小鼠、大鼠、兔、羊驼、人源化小鼠、犬、羊、鸡等多物种抗体发现，通过高通量筛选获得抗原特异性记忆B细胞或浆细胞，单细胞PCR扩增及Sanger测序获取抗体基因序列，并进行重组表达与验证。平台可将抗体发现过程中的binding/blocking功能筛选前置，更快锁定阳性克隆，从动物免疫到获得单抗，快至29天，节省研发时间和费用。

杂交瘤技术

杂交瘤技术是一种将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合生产单克隆抗体的传统方法。该技术通过将动物脾细胞与骨髓瘤细胞融合，产生永生化杂交瘤细胞系，然后筛选其上清液中的抗原特异性克隆，并进一步循环亚克隆以产生严格的单克隆抗体。

利用杂交瘤制备单克隆抗体通常操作流程为：抗原制备、用抗原免疫动物、取免疫动物的脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞、对杂交瘤细胞进行筛选及克隆化、利用筛选得到的杂交瘤细胞进行单克隆抗体的大量生产。了解杂交瘤制备单克隆抗体的详细流程。

噬菌体展示技术

利用展示平台实现文库系统表达和筛选目标分子是单抗开发的重要手段。以噬菌体展示技术为例，其原理是将一段外源基因插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框正常且不影响外壳蛋白正常功能的情况下，外源基因会随着外壳蛋白的表达而表达，从而使多肽或蛋白以融合蛋白的形式展现在噬菌体表面。动物毒性抗原、自身抗原、免疫耐受原和弱免疫原性抗原，由于无法产生有效免疫，可采用展示技术获得的天然抗体库、合成或半合抗体库进行筛选。使用展示技术获得抗体通常为scFv（噬菌体表面展示制备scFv流程）、Fab形式而非全长抗体，且重轻链非天然配对，故亲和力和特异性较其他方法略有局限。

三大平台优劣势对比

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哺乳动物细胞蛋白表达

生产型高表达稳定细胞株构建